MycoLight 快速熒光細菌革蘭染色試劑盒為測定活細菌中的革蘭標志提供了一種簡(jiǎn)單方便的方法。革蘭染色是臨床和研究環(huán)境中常用的方法，用于將細菌物種分類(lèi)分類(lèi)為兩大類(lèi)。但是，傳統的革蘭染色方法是繁瑣的并涉及細菌固定，如果要進(jìn)一步表征細菌，這可能是一個(gè)顯著(zhù)的缺點(diǎn)。 MycoLight 快速熒光細菌革蘭染色試劑盒為活細菌提供一步革蘭染色分析，克服了傳統革蘭氏染色分析中固有的問(wèn)題。 MycoLight 快速熒光細菌革蘭染色試劑盒使用兩種DNA染料MycoLight Green和MycoLight Red，具有染色革蘭氏陽(yáng)性和陰性細菌的差異能力。 MycoLight Green染色革蘭氏陽(yáng)性和陰性細菌，而MycoLight Red優(yōu)先標記革蘭氏陽(yáng)性細菌。這兩種染料的激發(fā)/發(fā)射最大值對于MycoLight Green為約484 / 504nm，對于MycoLight Red為518 / 600nm。因此，當用染料染色革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性細菌的混合物時(shí)，革蘭氏陽(yáng)性細菌將發(fā)出紅色熒光，革蘭氏陰性細菌將發(fā)出綠色熒光。革蘭氏陽(yáng)性和陰性染色可分別用TRITC和FITC濾光片組進(jìn)行熒光監測。

樣品示例及操作

1.細菌樣品的制備

1.1準備濃度約為10⁷cells / ml的細菌樣品。 在適當的培養基中使細菌生長(cháng)到對數后期。 注意：在波長(cháng)= 600 nm（OD600）處測量細菌培養物的光密度，以確定細胞數。 對于大腸桿菌培養，OD600 = 1.0等于8 x 10⁸細胞/ ml。

1.2通過(guò)以10,000 x g離心10分鐘除去培養基，然后將沉淀重新懸浮在ddH₂O中，將細菌濃度調節至?10⁷細胞/ ml。

2.染色方案

2.1向100 μL細菌懸液中加入2 μL MycoLight 染料工作溶液。

2.2充分混合并在室溫下于黑暗中孵育15分鐘。

2.3用熒光顯微鏡通過(guò)FITC（Ex / Em = 488/530 nm）通道監測革蘭氏陰性細菌的熒光，并通過(guò)TRITC（Ex / Em = 540/620 nm）通道監測革蘭氏陽(yáng)性細菌的熒光。 注意：該試劑盒僅提供指導，應根據不同的細菌菌株或其他特定需求進(jìn)行優(yōu)化。 注意：該試劑盒中的革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌的相對比例也可以通過(guò)熒光光譜法估算。